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Aplicación 

Análisis cuantitativo de carbohidratos mediante LCMS

Existen diferentes métodos de separación y detección para el análisis de sacáridos por HPLC. Las técnicas de separación más comunes en el análisis de carbohidratos incluyen la distribución en fase normal y por intercambio de ligandos. Para la detección, se sabe que son eficaces el índice de refracción diferencial (RID) y la derivatización post-columna con medición de flurescencia.

En análisis de carbohidratos mediante LCMS, a menudo se utiliza la derivatización para mejorar la sensibilidad. Sin embargo, para evitar esta engorrosa operación de derivatización para ionización por electro spray (ESI), se suele agregar un solvente luego de la columna, mediante APCI, para permitir la ionización de compuestos de baja polaridad. Este agregado de solvente promueve la ionización, permitiendo así una detección estable de iones. A continuación se presentan ejemplos de análisis cuantitativos de carbohidratos en alimentos añadiendo solvente luego de la columna.

Análisis de carbohidratos mediante LCMS-2020
En la Figura 1 se muestran cromatogramas de carbohidratos. Como solvente se utilizó una solución de metanol-cloroformo (4:1). Este solvente favorece la formación del aducto de iones de cloro ([M+Cl]-), lo que permite una detección estable de iones.
Puesto que el agregado de solvente luego de la columna implica que las sustancias que se eluyen de la columna (incluida la fase móvil) se mezclan con el solvente, se utiliza un conector entre la columna y la interfaz (en este caso, APCI), y se una bomba separada para el traslado del solvente.

Fig. 1: Análisis LCMS (SIM) de carbohidratos mediante agregado de solvente (100 mg/L) luego de la columna (1: Ribosa, 2: Xilosa, 3: Ramnosa, 4: Fructosa, 5: Glucosa, 6: Sacarosa, 7: Maltosa)

Curvas de calibración

En la Tabla 1 se muestran los resultados de la cuantificación de cada substancia. Los valores RSD% corresponden a la desviación estándar relativa de la menor concentración usada en cada casoal generar las curvas de calibración.




































































MWm/zRango (mg/L)Coeficiente de correlaciónRSD %
Ribosa150,1184,8 [M+Cl]-0,5 – 1000,99993,40
Xilosa150,1184,8 [M+Cl]-0,1 – 1000,99965,13
Ramnosa164,2198,8 [M+Cl]-0,5 – 1000,99995,04
Fructosa180,2214,8 [M+Cl]-0,1 – 1000,99992,81
Glucosa180,2214,8 [M+Cl]-0,5 – 1000,99990,51
Sacarosa342,3376,9 [M+Cl]-1,0 – 1000,999610,22
Maltosa342,3376,9 [M+Cl]-5,0 – 1000,99964,92

Tabla 1: Curvas de calibración

Análisis de alimentos mediante LCMS-2020

En las Figuras 2 y 3 se muestran los resultados del análisis de alimentos. Las muestras fueron diluidas 1:10 usando agua destilada y ultra-filtradas (Microcon YM-3, MILLIPORE). El filtrado fue luego diluidop 1:1000 en agua destilada, y se inyectó 1 µL de cada muestra. La concentración de carbohidratos en los alimentos usados para el análisis fue de 360 mg/mL (glucosa) y 41,7 mg/mL (maltosa) en el sake dulce, y de 8,6 mg/mL (fructosa), 12,1 mg/mL (glucosa), y 32,4 mg/mL (sacarosa) en la gaseosa.

Fig. 2: Sake dulce (1 µL inyectado)

Fig. 3: Gaseosa (1 µL inyectado)

Fig. 2: Sake dulce (1 µL inyectado)

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