Uno de los aspectos más complejos del análisis LC-MS/MS de biomarcadores esteroides es la presencia de interferencias, normalmente causadas por compuestos isobáricos u otros componentes de la matriz. Estas interferencias pueden presentarse en la forma de picos cromatográficos no resueltos, o bien como una línea de base demasiado alta. En cualquier caso, si el analito de interés no puede ser adecuadamente resuelto, esto tendría un impacto adverso en el límite de cuantificación y el rango dinámico, lo cual implicaría comprometer el análisis.
La eliminación de interferencias suele ser realizada ajustando las condiciones HPLC y la metodología de preparación de la muestra. Habitualmente esto implica extender la duración de la corrida cromatográfica, o bien realizar una limpieza de la muestra más complicada y laboriosa. Sin embargo, ninguna de estas dos soluciones es verdaderamente deseable, ya que ambas requieren más tiempo y añaden un costo considerable para el análisis de muestras. Además, aún cuando estas interferencias puedan ser resueltas cromatográficamente, todavía se pierde más tiempo en la revisión de datos si las integraciones de pico necesitan un ajuste manual muestra por muestra.
Últimamente se han logrado avances significativos para aumentar la selectividad MS/MS por encima del actual método de referencia (MRM). Por ejemplo, el método MRM3 en el sistema QTRAP® 5500 suma mayor selectividad al incrementar el nivel de fragmentación. Los sistemas de espectrometría de masas de alta resolución también ofrecen una mayor selectividad. No obstante, en muchos casos ni siquiera los sistemas que brindan mayor exactitud y resolución pueden ayudar a distinguir las interferencias, ya que la masa exacta de alguno de estos compuestos puede ser idéntica a la del analito buscado. Este es un problema recurrente en el análisis de biomarcadores esteroides, ya que suele haber numerosas interferencias endógenas presentes en las matrices biológicas. La separación por movilidad iónica presenta una alternativa muy atractiva, ya que agrega selectividad durante la introducción de la muestra, luego de una ionización a presión atmosférica. Aunque las técnicas de movilidad iónica se han utilizado en forma extensiva para aplicaciones de tipo cualitativo, hasta el momento nunca han logrado tener la robustez, selectividad, velocidad y sensibilidad necesarias para realizar análisis de rutina con grandes volúmenes de muestras.
La nueva tecnología de movilidad iónica AB SCIEX SelexION™, acoplada al sistema QTRAP® 5500, brinda los medios para una separación por movilidad iónica diferencial en matrices complejas para el análisis de biomarcadores esteroides. Esto ha sido logrado gracias a una diversidad de innovaciones importantes en lo que hace a la movilidad iónica.
