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Aplicación 

UFLC: Análisis de aflatoxinas con cromatografía líquida de alta velocidad y alta resolución

Las aflatoxinas son producidas por el hongo Aspergillus, y además de ser extremadamente tóxicas son también conocidas por ser cancerígenas. sta notificación especifica el uso de cromatografía líquida (HPLC) con detección fluorimétrica, utilizando una derivatización con ácido trifluoroacético para el análisis de aflatoxinas. Esta notificación especifica el uso de cromatografía líquida (HPLC) con detección fluorimétrica, utilizando una derivatización con ácido trifluoroacético para el análisis de aflatoxinas.


Aflatoxina G2
Aflatoxina G2

En Japón, los métodos para el análisis de aflatoxinas en el maní, el maíz y otros productos alimenticios están prescriptos en “Métodos de testeo de aflatoxina B1 en cereales, frijoles, nueces y semillas, y condimentos” (Notificación Nº 0326001 del Ministerio de Salud, Trabajo y Bienestar, fechada el 26/03/2002).

Esta edición de Novedades de Aplicación introduce un ejemplo de análisis de aflatoxinas de alta velocidad, utilizando el sistema LC Prominence UFLC ultra-fast con la columna Shim-pack XR-ODS de alta velocidad y alta resolución.

Análisis de una solución estándar

Como las aflatoxinas B1 y G1 muestran una fluorescencia natural débil, este método emplea la reacción de ellas con ácido trifluoroacético (TFA) para convertirlas en las aflatoxinas hidróxi-derivadas B2a y G2a, respectivamente. Con esto se busca aumentar su intensidad de fluorescencia para el análisis. Las aflatoxinas B2 yG2 no reaccionan con el TFA.


Cromatograma de una mezcla estándar de cuatro aflatoxinas (cada una de 10 µg/L)
Figura 1: Cromatograma de una mezcla estándar de cuatro aflatoxinas (cada una de 10 µg/L)

La Figura 1 muestra los resultados de una solución estándar, mezcla de las aflatoxinas puras a una concentración unitaria de 10 µg/L, utilizando un volumen de inyección igual a 4 µL . Las condiciones analíticas de muestran en la Tabla 1.


Tabla 1
Tabla 1

Utilizando el Shim.pack XR-ODS (diámetro de partícula = 2.2 µm), el ciclo de análisis se completó en sólo 3 minutos.


Estructuras de aflatoxinas y los derivados obtenidos con TFA
Figura 2: Estructuras de aflatoxinas y los derivados obtenidos con TFA

La Figura 2 muestra las estructuras de las aflatoxinas y los derivados obtenidos luego de la reacción con TFA.

Linealidad


Linealidad
Figura 3: Linealidad

La Figura 3 muestra la linealidad de las curvas de calibración (volumen de inyección = 4 µL ) de la mezcla estándar de aflatoxinas. La concentración unitaria se varió entre 1 y 50 µg/L. Se obtuvo una excelente linealidad para cada compuesto, todas con un coeficiente de determinación (R2) mayor a 0.999.

Análisis de maíz


Cromatograma de maíz
Figura 4: Cromatograma de maíz

La Figura 4 muestra los resultados de una solución de extracto de maíz contaminada con aflatoxinas. La preparación de la muestra se llevó a cabo según el procedimiento estándar, consistente en una extracción en fase sólida seguida por la derivatización con TFA (para detalles, contacte a nuestra Gerencia de Capacitación y Aplicaciones ). En esta solución se detectaron aflatoxinas B1 y B2 en concentraciones de 15 µg/L y de 1 µg/L , respectivamente.

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