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Aplicación 

Análisis de impurezas potencialmente genotóxicas en ingredientes farmacéuticos activos: análisis de haluros de alquilo

Los haluros de alquilo se utilizan como agente alquilante de ingredientes primarios en la síntesis de fármacos o se generan como productos derivados de dicha síntesis. Se los ha identificado como potencialmente cancerígenos o genotóxicos. A continuación se muestra un ejemplo de análisis de 18 haluros de alquilo utilizando GC-MS con muestreo headspace

Experimental

Se prepararon mezclas estándar diluyendo 18 tipos de haluros de alquilo en metanol, logrando concentraciones de 0,2, 2, 10, 20 y 100 µg/mL. Se preparó una solución estándar interna diluyendo fluorobenceno en metanol en una concentración de 20 µg/mL. Se prepararon muestras colocando 20 mg de los ingredientes farmacéuticos en un vial de 20 mL con tapa a rosca, diluyéndola con 10 mL de agua Milli-Q, agregando 10 µL de la solución estándar interna, y finalmente sellando el vial con su tapa magnética.

También se prepararon muestras estándar acuosas agregando 10 µL de cada mezcla de haluros de alquilo y 10 µL de la solución estándar interna a 10 mL de agua Milli-Q. Las concentraciones de estas muestras acuosas fueron de 0,2, 2, 10, 20 y 100 ng/mL, equivalentes a concentraciones de 0,1, 1, 5, 10 y 50 ng/mg en los ingredientes farmacéuticos activos.

Condiciones analíticas

Para la medición se utilizó el modo FASST (“Fast Automated Scan/SIM Type”), que permite realizar mediciones de tipo Scan y SIM en forma simultánea. Las condiciones analíticas se muestran en la Tabla 1.

Tabla 1: Condiciones Analíticas




















GC-MSGCMS-QP2010 Ultra
Muestreador automáticoAOC-5000 Plus (HS)
ColumnaRtx-1 (60 m, 0,25 mm d.i., 1,0 µm
Inserto de vidriotipo Split, desactivado, con lana de vidrio
























































AOC-5000 Plus (HS)
Temperatura de incubación80ºC
Tiempo de incubación30 min
Temperatura de la jeringa100ºC
Velocidad del agitador250 rpm
Velocidad de llenado500 µL/s
Tiempo de ascenso de la muestra500 ms
Injectar enGC inyector 1
Velocidad de inyección500 µL/s
Retraso de pre-inyección500 ms
Tiempo de limpieza de jeringa5 min
Tiempo de corrida25 min
Volumen de inyección1 mL
































GC
Temperatura de inyección230ºC
Temperatura del horno40ºC (2 min) -> (20ºC/min) -> 250ºC (4 min)
Modo de inyecciónSplit
Gas portadorHelio
Modo de control del flujoVelocidad lineal (25,5 cm/s)
Relación de split10








































MS
Temperatura de interfaz230ºC
Temperatura de la fuente de iones230ºC
Modo de sintoníaAlta sensibilidad
Modo de mediciónFASST
Rango de barrido de masasm/z 30-270
Duración del evento Scan0,05 s
Velocidad de barrido10.000 u/s
Duración del evento SIM0,3 s




















































































Monitoreo SIM m/z :
Clorometano50, 52
Cloruro de vinilo62, 64
2-Cloropropano43, 78
Iodometano142, 127
1-Cloropropano42, 78
trans-1,2-dicloroetileno61, 96
2-Bromopropano43, 122
cis-Dicloroetileno61, 96
2-Cloroacrilonitrilo87, 52
1-Cloro-2-metilpropeno55, 90
1-Bromopropano43, 122
2-Iodopropano43, 170
Fluorobenceno96, 70
1-Bromo-2-metilpropeno55, 134
1-Iodopropano43, 170
trans-1,2-Dibromoetileno186, 105
cis-1,2-Dibromoetileno186, 105
trans-3-Bromo-2-metilacrilonitrilo66, 145
cis-3-Bromo-2-metilacrilonitrilo66, 145

### Resultados

En la Fig. 1 se muestra el cromatograma de corriente total de iones (TIC) de la solución acuosa estándar en una concentración de 100 ng/mL (equivalente a una concentración de 50 ng/mg en los ingredientes farmacéuticos activos). En la Fig. 2 se muestran los cromatogramas SIM de los seis componentes típicos en la solución acuosa estándar en una concentración de 0.2 ng/mL (equivalente a una concentración de 0,1 ng/mg en los ingredientes farmacéuticos activos).

Figura 1: Cromatograma de la corriente total de iones Figura 1: Cromatograma de la corriente total de iones







































































































IDComponenteTiempo de retención
1Clorometano4,391
2Cloruro de vinilo4,590
32-Cloropropano5,700
4Iodometano5,938
51-Cloropropano6,258
6trans-1,2-dicloroetileno6,507
72-Bromopropano6,744
8cis-Dicloroetileno7,041
92-Cloroacrilonitrilo7,051
101-Cloro-2-metilpropeno7,313
111-Bromopropano7,367
122-Iodopropano8,049
13Fluorobenceno8,068
141-Bromo-2-metilpropeno8,476
151-Iodopropano8,672
16trans-1,2-Dibromoetileno8,994
17cis-1,2-Dibromoetileno9,386
18trans-3-Bromo-2-metilacrilonitrilo10,088
19cis-3-Bromo-2-metilacrilonitrilo10,671

Figura 2: Cromatograma de masas SIM típico para una concentración de 0.1 ng/mg en ingredientes activos farmacéuticos Figura 2: Cromatograma de masas SIM típico para una concentración de 0.1 ng/mg en ingredientes activos farmacéuticos

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